- ПЦР ISSR
ПЦР ISSR * ПЛР ISSR * ISSR-PCR or PCR of Inter-Simple Sequence Repeats — метод, суть которого заключается в том, что в качестве участков отжига праймеров используют микросателлитные локусы, а амплифицируют участки, находящиеся между их инвертированными повторами. Праймеры состоят из корового мотива, комплементарного микросателлитному повтору, и нескольких (1-4) якорных нуклеотидов на 51- или 31-конце, определяющих место отжига праймера. Мультилокусные спектры амплификации, получаемые в ISSRПЦР, насчитывают 10-60 полос, которые разделяют в агарозном или полиакриламидном геле. Преимущество метода по сравнению с RAPD-PCR заключается в том, что такой подход увеличивает точность отжига, воспроизводимость амплифицированных фрагментов и уменьшает анонимность амплифицируемых участков, поскольку о них, по крайней мере, известно, что это относительно короткие фрагменты ДНК, заключенные между инвертированными повторами микросателлитного локуса. Для проведения амплификации необходимо небольшое количество ДНК (5-50 нг на 1 реакцию). Не требуется предварительногознания нуклеотидной последовательности при дизайне праймеров. Амплифицируются как структурные, так и некодирующие участки генома, однако получаемый спектр ампликонов имеет определенные ограничения, связанные с условиями амплификации. Так, в частности, недоступными для анализа являются фрагменты слишком большой длины (больше 2,5-3 кб). Маркеры ISSR-ПЦР к настоящему времени получили широкое распространение для решения проблем оценки генетических связей между генофондами (в основном растений), чему способствовали такие свойства метода, как относительно высокая точность и воспроизводимость, доминантный тип наследования, высокий уровень полиморфизма.
Генетика. Энциклопедический словарь. - Минск: Белорусская наука. Картель Н. А., Макеева Е. Н., Мезенко А. М.. 2011.